Flow Cytometry (lab imunology)

Flow cytometry merupakan  alat yang berfungsi sebagai pengukur berbagai komponen sel seperti asam nukleat, protein dan lainnya dimana pada masing² alatnya flow cytometry ini dibagi menjadi beberapa alat yaitu ada detektor, lasers or comparable measuring system, and data acquisition system, dari masing-masing alat tersebut memiliki fungsinya masing-masing dan dari setiap fungsinya itu berkaitan 1 sama lainnya yang nantinya hasil akhirnya akan di lihat di acquisition system.

flow cytometry kit
flow cytometry reagen (yang dijadikan sampel penelitian)

Untuk prinsip kerjanya sendiri secara singkatnya alat ini dapat digunakan untuk melihat sel² beserta isinya sampai kepada akar-akar nya. Seperti contoh ingin memeriksa pasien yang memiliki riwayat penyakit leukimia kemudian, diperiksa leukosit nya . Jika memakai mikroskop saja itu masih kelihatan seperti bulatan yang sama dan hanya bisa melihat bentuk nya saja yang berbeda tetapi, jika memakai flow cytometry ini bisa dilihat bagaimana kurva perbedaan negatif, positif dan oposisi nya.

prinsip kerja flow cytometry

untuk lebih mudah memahaminya bisa klik dan lihat link dibawah ini

overview & prinsip kerja flow cytometry

Bagaimana cara kerjanya?

Saat setiap sel bergerak melalui balok, parameternya (karakteristik) diukur dan dicatat, bersama dengan waktu yang dilaluinya melalui balok. Biasanya, data dikumpulkan untuk setidaknya 10.000 sel per sampel.

Flow cytometers berisi tiga sistem utama—fluida, optik, dan elektronik.

Sistem fluidics menyalurkan sampel sel (misalnya, sampel darah manusia) ke dalam aliran tunggal sehingga sel melewati sinar laser satu per satu. Saat setiap sel melewati sinar, ia menyebarkan cahaya dan dapat memancarkan cahaya neon. Sinyal cahaya ini dikumpulkan oleh sistem optik dan diarahkan ke berbagai detektor. Sinyal yang diterima oleh detektor kemudian diubah menjadi nilai numerik oleh sistem elektronik. Hasil dapat ditampilkan di layar atau disimpan untuk analisis di masa mendatang menggunakan perangkat lunak yang dirancang khusus.

Hasil sel yang di flow cytometry

 

Penyortiran

Pertama parameter ditetapkan sehingga flow cytometer dapat mengidentifikasi sel yang diinginkan. Aliran cairan yang mengandung sampel disalurkan pada tekanan tinggi oleh sistem fluidik ke dalam aliran tunggal sehingga sel melewati satu per satu melalui sinar laser di mana informasi tentang sel terdeteksi. Jika sel cocok dengan parameter yang ditentukan, sitometer menerapkan muatan listrik padanya. Hal ini menyebabkan sel bermuatan dibelokkan ke arah tabung pengumpul.Peneliti kemudian dapat mengambil sel yang diinginkan dan menumbuhkannya dalam kultur atau mempelajarinya dalam pengujian lain. Tetesan-tetesan yang tidak bermuatan itu terus mengalir ke wadah sampah. Prosesnya cepat dan dapat dilakukan dengan kecepatan hingga 20.000 sel per detik.Temukan penyortir sel yang paling tepat untuk eksperimen Anda. BD Biosciences menawarkan berbagai penyortir sel penelitian untuk berbagai aplikasi penelitian, mulai dari sistem benchtop sederhana hingga sistem canggih yang dapat dikonfigurasi sepenuhnya.

Mengukur karakteristik sel

Saat sel melewati sinar laser, cahaya tersebar ke arah yang berbeda. Mengukur seberapa banyak dan ke arah mana cahaya dihamburkan membantu peneliti menentukan ukuran dan kompleksitas internal sel. Menggunakan flow cytometry, lebih dari satu populasi sel dapat dipelajari pada satu waktu dan informasi di luar ukuran dan kompleksitas dapat diperoleh.

Fluoresensi sebagai penanda sel dan aktivitas seluler

Antibodi monoklonal sering dikaitkan dengan pewarna fluoresen (fluorokrom) yang akan memancarkan cahaya fluoresen saat dieksitasi oleh laser. Fluorokrom memungkinkan sel-sel yang terikat pada antibodi atau penanda untuk dilacak. Sebagian besar sel tidak memancarkan cahaya fluoresen secara alami. Namun, jika antibodi monoklonal yang ditandai dengan fluorokrom terikat pada antigen yang ada pada sel, sinyal cahaya fluoresen akan diambil ketika sel tersebut melewati sinar laser dari flow cytometer.

Fluorochromes berbeda satu sama lain sehubungan dengan warna cahaya yang akan mereka pancarkan. Misalnya, FITC, salah satu penawaran fluorokrom BD, akan memancarkan cahaya hijau, sedangkan PE, salah satu dari penawaran BD fluorokrom, akan memancarkan cahaya oranye saat terkena laser yang digunakan dalam sitometer aliran kami. Penggunaan fluorokrom yang berbeda membantu peneliti membedakan antara populasi sel atau aktivitas seluler yang berbeda.

BD ANALYZER

Untuk lebih memahami cara kerja dari flow cytometry bisa di lihat di link bawah ini

animasi kerja flow cytometry

Referensi :

https://www.bdbiosciences.com/en-sg/learn/applications/multicolor-flow-cytometry#Overview