Definisi : ELISA (enzyme-linked immunoassay) merupakan teknik yang menggabungkan spesifisitas antibodi dengan sensitivitas uji enzim secara sederhana, dengan menggunakan antibodi atau antigen yang digabungkan ke dalam suatu enzim yang mudah diuji.
Fungsi :
- Mengukur antigen dan antibodi
- Mendeteksi infeksi virus, terutama yang penularannya melalui darah, seperti HBV, HCV, HIV, dan HTLV
- Mendeteksi apakah ada antigen yang dikenali antibodi/sebaliknya
- Menentukan jumlah antigen yang tidak diketahui pada sampel
Dengan cara mengikatkan antigen dengan antibodi spesifik yang ditempelkan di permukaan dinding ELISA plate
Prinsip Kerja :
ELISA menggunakan metode absorbansi cahaya, dimana sampel diukur berdasarkan kemampuannya dalam menyerap cahaya yang diberikan.
ELISA memiliki 4 jenis, yaitu :
- Direct ELISA Test (untuk deteksi antigen)
Protein target (atau antibodi target) diimobilisasi pada permukaan microplate wells dan diinkubasi dengan antibodi berlabel enzim terhadap protein target (atau antigen spesifik pada antibodi target). Setelah pencucian, aktivitas enzim yang terikat dengan baik pada lempeng mikro diukur.
- Indirect ELISA Test (untuk deteksi antigen)
Protein target diimobilisasi pada permukaan microplate wells dan diinkubasi dengan antibodi terhadap protein target (antibodi primer), diikuti oleh antibodi sekunder terhadap antibodi primer. Setelah pencucian, aktivitas enzim yang terikat dengan baik pada lempeng mikro diukur.
Meskipun ELISA tidak langsung membutuhkan lebih banyak langkah daripada ELISA langsung, antibodi sekunder berlabel tersedia secara komersial, menghilangkan kebutuhan untuk memberi label pada antibodi primer.
- Sandwich ELISA (untuk deteksi antibodi)
Antibodi terhadap protein target diimobilisasi pada permukaan microplate wells dan diinkubasi pertama dengan protein target dan kemudian dengan antibodi spesifik protein target lainnya, yang diberi label dengan enzim. Setelah pencucian, aktivitas enzim yang terikat dengan baik pada lempeng mikro diukur. Antibodi amobil (oranye) dan antibodi berlabel enzim (hijau) harus mengenali epitop berbeda dari protein target.
- Combined ELISA (untuk deteksi antibodi)
Antibodi spesifik untuk protein target diimobilisasi pada permukaan microplate wells dan diinkubasi dengan sampel yang mengandung protein target dan sejumlah protein target berlabel enzim yang diketahui.
Setelah reaksi, aktivitas enzim yang terikat dengan baik pada lempeng mikro diukur. Ketika tingkat antigen dalam sampel tinggi, tingkat antigen berlabel enzim yang terikat antibodi lebih rendah dan warnanya lebih terang. Sebaliknya, ketika rendah, tingkat antigen berlabel enzim yang terikat antibodi lebih tinggi dan warnanya lebih gelap. Grafik di atas dan di sebelah kanan menggambarkan korelasi antara penyerapan dan tingkat antigen dalam sampel.
Notes = Antibodi yang berikatan dengan enzim akan berubah warna → intensitas warna = jumlah antigen → ELISA reader akan mendeteksi berapa jumlah antigen
Dikutip dari: