Definisi:
- High = tinggi
- Pressure = tekanan
- Liquid = cairan
- Chromatography = suatu metode pemisahan molekul yang melibatkan fase diam dan fase gerak
HPLC = metode pemisahan molekul dengan media cair yang diberikan tekanan tinggi → mengetahui kadar berbagai senyawa kimia
Fungsi :
- memisahkan komponen (berupa molekul) yang berada pada suatu larutan (contoh = obat, makanan atau herbal)
- pemurnian
- analisis kualitatif
- analisis kuantitatif
- Menentukan marker pada suatu obat herbal
Prinsip Kerja :
Hal yang berkaitan dengan HPLC =
- Fase gerak dan fase diam
- Fase gerak = cairan → bisa polar/nonpolar
- Fase diam = padat/cair → bisa polar/nonpolar
- Polar dan non polar
- Polar = larut dalam air, karbon rantai pendek
- nonPolar = tidak larut dalam air, karbon rantai panjang (≥ 18 rantai)
- Fase normal dan terbalik
Penggunaan akan mengacu pada fase ini- Normal = fase diam (polar) & fase gerak (nonpolar)
- Terbalik = fase diam (nonpolar) & fase gerak (polar)
Cara kerja secara singkat =
- HPLC memisahkan molekul berdasarkan perbedaan afinitasnya terhadap zat padat tertentu (setiap senyawa mempunyai afinitas selektif antara fase diam tertentu dan fase gerak tertentu)
- Fase Gerak masuk (solvent dan sample) → dipompa menggunakan pump untuk memberikan tekanan → fase gerak dapat mengalir → masuk ke dalam column → terjadi proses pemisahan → hasil dideteksi → keluar dalam bentuk kromatogram
- Jenis komponen fase gerak dan fase diam akan menentukan hasil (sesama polar akan lebih mudah terikat)
Dikutip dari :