Flow Cytometry (FACS)

Definisi : Flow cytometry (FCM) merupakan salah satu metode analisis untuk diagnosis berbagai komponen seluler (asam nukleat, lemak, protein), organel (lisosom, mitokondria), bahkan fungsi (viabilitas, aktivitas enzimatis) dari komponen tersebut.

Fungsi : mendeteksi abnormalitas sel dalam sampel.

Salah satu metodenya adalah Fluorescence-activated Cell Sorting (FACS), dimana menggunakan fluoresensi untuk langsung menyortir dan mendiagnosa sel-sel pada sampel yang digunakan berdasarkan warna yang terdeteksi.

Prinsip Kerja :

  1. Flow cytometry menggunakan prinsip menyebarkan cahaya, eksitasi cahaya, dan pemancaran molekul fluorokrom untuk menghasilkan data multi parameter yang spesifik dari partikel dan sel yang memiliki rentang ukuran diameter antara 0,5–40 μm. 
  2. Secara hidrodinamika, sel-sel difokuskan dalam sebuah tabung sebelum melewati dan disinari oleh sumber cahaya. 
  3. Laser merupakan sumber cahaya yang digunakan pada Flow cytometry, dan prinsip kerja yang digunakan memfokuskan hidrodinamika untuk mempresentasikan sel ke sumber cahaya. Pada tahap ini sel akan tersinari oleh laser dan dipresentasikan kembali dalam bentuk suatu diagram tertentu berdasarkan parameter dibawah ini:
    1. Parameter FSC (Forward Scatter) merupakan parameter yang menunjukkan ukuran dari sel yang teramati. Prinsip pengukuran dari FSC dilakukan dengan mengukur jarak sinar laser yang terhalangi oleh sel yang diterima Forward Detector. Semakin besar jarak tersebut, maka sel itu memiliki ukuran yang relatif lebih besar.
    2. Parameter SSC (Side Scatter) adalah parameter yang menunjukkan struktur internal atau granularitas dari sel yang teramati. Prinsip pengukuran dari SSC dilakukan dengan mengukur jumlah sinar laser yang terhalangi & dibelokkan oleh struktur internal sel yang diterima detektor. Semakin banyak berkas yang dibelokkan dan diterima Side Detector, maka sel itu memiliki struktur internal yang relatif lebih kompleks.
  4. Hasil dari penyinaran tersebut nantinya akan ditampilkan dalam histogram pada komputer

Secara singkat : Sampel masuk → difokuskan di tabung → diberikan sheath fluid biar komponen sampel terpisah → dideteksi dengan sinar laser

  • FSC (forward scatter) = menunjukkan ukuran
  • SSC (side scatter) = menunjukkan struktur internal/granularitas

Dengan pewarnaan = pewarnaan akan berbeda karena tiap sel punya protein permukaan yang berbeda → warna beda

Dikutip dari :