HPLC (High Pressure Liquid Chromatography) adalah suatu metode pemisahan molekul dengan media cair yang diberikan tekanan tinggi untuk mengetahui kadar berbagai senyawa kimia.
Prinsip Kerja
Terdapat hal-hal yang berkaitan dengan HPLC, antara lain:
-
- Fase gerak dan fase diam
- Fase gerak = cairan → bisa polar / nonpolar
- Fase diam = padat/cair → bisa polar / nonpolar
- Polar dan non polar
- Polar = larut dalam air, karbon rantai pendek
- nonPolar = tidak larut dalam air, karbon rantai panjang (≥ 18 rantai)
- Fase normal dan terbalik
Penggunaan akan mengacu pada fase ini:- Normal = fase diam (polar) & fase gerak (nonpolar)
- Terbalik = fase diam (nonpolar) & fase gerak (polar)
- Fase gerak dan fase diam
HPLC memisahkan molekul berdasarkan perbedaan afinitasnya terhadap zat padat tertentu (setiap senyawa mempunyai afinitas selektif antara fase diam tertentu dan fase gerak tertentu).
Prosesnya: Fase Gerak masuk (solvent dan sample) → dipompa menggunakan pump untuk memberikan tekanan → fase gerak dapat mengalir → masuk ke dalam column → terjadi proses pemisahan → hasil dideteksi → keluar dalam bentuk kromatogram.
Jenis komponen fase gerak dan fase diam akan menentukan hasil (sesama polar akan lebih mudah terikat).
Dikutip dari: